多色探针熔化弧线法（Multicolor Melting Curve Analysis， MMCA）和高分辨率熔化弧线法（High Resolution Melting， HRM）皆是基于及时荧光PCR时间的核酸检测本领野外 露出，但它们在旨趣和应用上有所不同。
孟若羽 肛交多色熔化弧线分析时间（Multicolor Melting Curve Analysis， MMCA）基于探针法和熔化弧线分析法，聚合多色荧光检测，可同期检测一个响应中的多个靶标。其探针接纳双符号、自淬灭的TaqMan探针或分子信标。
检测旨趣为：当TaqMan探针游离于溶液中处于无章程卷曲情景时，或分子信标由于茎部碱基的互补配对酿成茎环结构时，探针上符号的荧光基团与淬灭基团相对围聚，因荧光能量共振滚动(fluorescence resonance energy transfer， FRET)使得荧光信号较弱。而当响应体系中存在靶标序列时，探针与靶标序列互补配对，酿成伸展情景，荧光基团和淬灭基团相对隔离，辐射出较强的荧光信号。
当扩增完成，产品量达到最岑岭，荧光信号也最强，此时再对扩增产品进行升温检测，则杂交在产品上的探针与靶标序列徐徐解离，酿成无章程卷曲情景，荧光信号徐徐削弱，绘图温度与荧光信号的变化弧线图，即可进行熔化弧线分析。
不错通过蓄意不同Tm的探针来扬弃一个荧光通谈检测多个靶方向指标。因此不错在惯例qPCR实践中扬弃几重到几十重的中高通量靶标检测的指标。
4重荧光通谈检测10个靶标示例
高分辨率熔化弧线划定是一种无需使用序列特异性探针的时间，它运用一种富饶染料对PCR响应产品进行分析。
HRM的基开心趣是双链核苷酸（dsDNA）的热健硕性受其长度和碱基构成的影响，序列变化会导致升温过程中dsDNA解链当作的调动。通过及时检测dsDNA熔化过程中荧光信号值的变化，不错生成不同款式的熔化弧线，从而将PCR产品中存在的相反直不雅地展示出来。
高分辨率熔化弧线法检测SNP成果暗意图
多色探针熔化弧线法（MMCA）和高分辨率熔化弧线法（HRM）在操作经过和实践条目上的主要区别如下：
1.探针使用：
·MMCA：需要使用特异性的荧光符号探针，这些探针在蓄意时会探究其熔化温度（Tm值），以便在熔化弧线分析中提供所需的信息。
·HRM：不需要使用序列特异性探针，而是运用富饶荧光染料（如LC Green、Eva Green等）对PCR产品进行分析。
2.PCR扩增：
·MMCA：在PCR扩增过程中，探针会特异性聚合到扩增产品上。在扩增完成后，通过升温使探针与产品解离，从而取得熔化弧线。
·HRM：PCR扩增后，平直对产品进行高分辨率熔化分析，通过监测荧光信号的变化来取得熔化弧线。
3.数据分析：
·MMCA：通过分析不同探针的熔化弧线，不错诀别不同的靶序列，包括野生型、纯合突变型和杂合突变型。
·HRM：通过分析统共这个词PCR产品的熔化弧线，不错检测到单碱基突变，而况聪惠度不错达到1%-0.1%。
4.实践条目：
·MMCA：需要优化PCR响应体系中的引物浓度，以酿成分歧称PCR，减少探针的水解，并可能需要特定的荧光PCR仪来扬弃多色荧光通谈的检测。
·HRM：需要使用高精度的PCR仪（温度分辨率需要达到0.02~0.1℃，温度均一性不异要求较高，Tm的要领偏差为0.020-0.264℃）来扬弃高分辨率的熔化弧线分析。
5.应用界限：
·MMCA：适用于快速筛查致病基因、检测病原体、进行分类顽强等。
·HRM：除了突变扫描和基因分型，HRM还可用于甲基化连络、基因组配型、物种顽强等限度。
在分子会诊限度野外 露出，多色探针熔化弧线法（MMCA）和高分辨率熔化弧线法（HRM）是两种紧迫的时间，它们各自具有独到的上风和应用场景。